本公开提供一种生产细胞培养肉的方法，包括：根据细胞贴壁能力的区别，分别从动物的肌肉组织、脂肪组织中分离肌肉前体细胞、脂肪前体细胞；将肌肉前体细胞和脂肪细胞混合，导入细胞外基质薄层，进行3D培养扩增，获得细胞肉培养薄层；将多个细胞肉培养薄层叠加，用生长培养液培养，然后用成肌分化培养液培养，得细胞培养肉。本公开的方法分离前体细胞效率高，成本低，培养过程很好地保持前体细胞的特性，分化成肌肉纤维更有效和粗壮，脂肪细胞和肌肉细胞共培养改善了细胞培养肉的口感和营养，所得的细胞肉为宠物食品提供了更安全、健康和
(19)国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 117004555 A (43)申请公布日 2023.11.07 (21)申请号 1.8 (22)申请日 2023.08.17 (71)申请人 山东卓东生物科技有限公司 地址 250000 山东省济南市高新区综合保 税区经十东路与港西路交叉口西南角 未来创业广场2号楼6层601、602室 (72)发明人 牟晓东甘元善 (74)专利代理机构 泰和泰律师事务所 51219 专利代理师 谢执胜刘梦菲 (51)Int.Cl. C12N 5/071 (2010.01) A23K 10/16 (2016.01) C12N 5/077 (2010.01) 权利要求书1页 说明书6页 附图2页 (54)发明名称 一种细胞培养肉的制备方法 (57)摘要 本公开提供一种生产细胞培养肉的方法，包 括：根据细胞贴壁能力的区别，分别从动物的肌 肉组织、脂肪组织中分离肌肉前体细胞、脂肪前 体细胞 ；将肌肉前体细胞和脂肪细胞混合，导入 细胞外基质薄层，进行3D培养扩增，获得细胞肉 培养薄层；将多个细胞肉培养薄层叠加，用生长 培养液培养，然后用成肌分化培养液培养，得细 胞培养肉。本公开的方法分离前体细胞效率高， 成本低，培养过程很好地保持前体细胞的特性， 分化成肌肉纤维更有效和粗壮，脂肪细胞和肌肉 细胞共培养改善了细胞培养肉的口感和营养，所 得的细胞肉为宠物食品提供了更安全、健康和环 A 保的选择。 5 5 5 4 0 0 7 1 1 N C CN 117004555 A 权利要求书 1/1 页 1.一种生产细胞培养肉的方法，包括以下步骤： I. 从动物的肌肉组织中分离肌肉前体细胞，从动物的脂肪组织中分离脂肪前体细胞； II. 将所述肌肉前体细胞和所述脂肪前体细胞混合，导入细胞外基质薄层，进行3D培 养扩增，获得细胞肉培养薄层； III. 将多个所述细胞肉培养薄层叠加，用生长培养液培养，然后用成肌分化培养液培 养，得细胞培养肉。 2.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述步骤I中，利用肌肉前体细胞较慢地贴壁生 长的特性，将肌肉前体细胞与快速贴壁生长和不贴壁生长的肌肉组织内其它细胞分离；利 用脂肪前体细胞较快地贴壁生长的特性，将脂肪前体细胞与慢速贴壁生长和不贴壁生长的 脂肪组织内其它细胞分离。 3.根据权利要求1所述的方法，其中 ，从动物的肌肉组织中分离肌肉前体细胞的过程 为：将肌肉组织酶解，将所得的细胞悬液接种在胶原蛋白包被的培养容器中，接种2 4小时 ~ 后，将含有未贴壁细胞的培养液转移到另一个胶原蛋白包被的培养容器中，继续培养24 36 ~ 小时后，洗去未贴壁细胞，保留贴壁生长的细胞，得到肌肉前体细胞，通过2D表面培养来初 步扩增肌肉前体细胞。 4.根据权利要求1所述的方法，其中 ，从动物的脂肪组织中分离脂肪前体细胞的过程 为：将脂肪组织酶解，将所得的细胞悬液接种在胶原蛋白包被的培养容器中，接种6 12小时 ~ 后，洗去未贴壁细胞，保留贴壁生长的细胞，得到脂肪前体细胞，通过2D表面培养来初步扩 增脂肪前体细胞。 5.根据权利要求1‑4任一项所述的方法，其中，所述细胞外基质薄层由以下方式制备： 将可食用植物切割为小片，用5% 15%十二烷基硫酸钠浸泡 2 4天 ，再用0 .1% 0.3% ~ ~ ~ TritonX‑100浸泡1 3天，经水洗、灭菌备用。 ~ 6. 根据权利要求1‑4任一项所述的方法，其中，所述肌肉前体细胞和所述脂肪细胞的 混合比例为1.5:1 10:1。 ~ 7. 根据权利要求1‑4任一项所述的方法，其中，在所述步骤II中，进行3D培养扩增时所 用的培养液中含有5 10 ng/ml的Jagged1多肽。 ~ 8.根据权利要求1‑4任一项所述的方法，其中，在所述步骤III中，细胞肉培养薄层叠加 的层数为4 6层。 ~ 9.根据权利要求1‑4任一项所述的方法，其中，在所述步骤III中，将多个所述细胞肉培 养薄层叠加，用生长培养液培养3 5天，然后用成肌分化培养液培养4 6天。 ~ ~ 10. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述生长培养液含有5 10 ng/ml的Jagged1多 ~ 肽，所述成肌分化培养液含有4 8 ng/ml的follistatin 344蛋白。 ~ 2 2 CN 117004555 A 说明书 1/6 页 一种细胞培养肉的制备方法 技术领域 [0001] 本发明涉及生物技术领域，尤其细胞应用领域，具体涉及一种利用动物高活性肌 肉和脂肪前体细胞生产细胞培养肉的方法。 背景技术 [0002] 人造肉，即细胞培养肉（cell‑based meat , CBM），近几年来得到全球舆论和市场 的广泛关注。联合国粮食及农业组织 （FAO）预测，到2050年，全球肉类需求将达到4.55亿吨， 比2005年增长76％。由于当前的大型畜牧业的生产方法与公共卫生问题的复杂性，以及肉 类生产相关的温室效应、环境退化和动物福利等问题，全球的不断增长的肉类需求引起了 越来越多的担忧和负面后果。畜牧业的大规模发展与食源性疾病、抗生素抗性和传染性疾 病的规模化流行相互关联，密切影响了人类的身体健康。畜牧业也加剧了环境问题，包括温 室气体排放，以及土地和水资源利用。还有动物福利和伦理问题，每年有数十亿动物被人类 食品系统的运转所直接或间接消灭。 [0003] 猫天生喜好捕食鼠 ，鼠肉富含大量的蛋白质和均衡的氨基酸、维生素，能让猫毛色 鲜亮，精力焕发。而且鼠肉富含牛磺酸，能加强猫夜视能力，如果长期缺乏就会患夜盲症。鼠 肉的营养成分对于猫而言相对比较健康，但野生鼠容易携带病原体，并不适合作为现代家 养宠物的食物。现阶段的宠物食品，例如猫粮，主要来源于鸡肉、鱼肉、牛肉等，这些肉类是 猫的常见的食物过敏原，而且其成分与猫的营养需求不完全匹配，需要额外添加营养成分。 另外，宠物肉类食品很多可能是来自动物内脏和骨头，甚至是由病死的动物肉制成，质量难 以控制。目前宠物肉类食品的生产并不能令人满意。 发明内容 [0004] 发明要解决的问题 现有的肉类食品生产伴随着环境、公共卫生、动物福利和伦理问题，供宠物食用的 肉类产品存在质量控制困难、成分不够健康等问题。本发明提供一种细胞培养肉的生产方 法，以解决现有技术一方面或多方面的问题。 [0005] 用于解决问题的方案 为实现上述目的，本公开提供一种生产细胞培养肉的方法，包括以下步骤： I. 从动物的肌肉组织中分离肌肉前体细胞，从动物的脂肪组织中分离脂肪前体 细胞； II. 将所述肌肉前体细胞和所述脂肪前体细胞混合，导入细胞外基质薄层，进行 3D培养扩增，获得细胞肉培养薄层； III. 将多个所述细胞肉培养薄层叠加，用生长培养液培养，然后用成肌分化培养 液培养，得细胞培养肉。 [0006] 在本公开进一步的方案提供的方法中，在所述步骤I中，利用肌肉前体细胞较慢地 贴壁生长的特性，将肌肉前体细胞与快速贴壁生长和不贴壁生长的肌肉内其它细胞分离； 3 3 CN 117004555 A 说明书 2/6 页 利用脂肪前体细胞较快地贴壁生长的特性，将脂肪前体细胞与慢速贴壁生长和不贴壁生长 的脂肪组织内其它细胞分离。 [0007] 在本公开进一步的方案提供的方法中，从动物的肌肉组织中分离肌肉前体细胞的 过程为：将肌肉组织酶解，将所得的细胞悬液接种在胶原蛋白包被的培养容器中，接种2 4 ~ 小时后，将含有未贴壁细胞的培养液转移到另一个胶原蛋白包被的培养容器中，继续培养 24 36小时后，洗去未贴壁细胞，保留贴壁生长的细胞，得到肌肉前体细胞，通过2D表面培养 ~ 来初步扩增肌肉前体细胞。 [0008] 在本公开进一步的方案提供的方法中，从动物的脂肪组织中分离脂肪前体细胞的 过程为：将脂肪组织酶解，将所得的细胞悬液接种在胶原蛋白包被的培养容器中，接种6 12 ~ 小时后，洗去未贴壁细胞，保留贴壁生长的细胞，得到脂肪前体细胞，通过2D表面培养来初 步扩增脂肪前体细胞。 [0009] 在本公开进一步的方案提供的方法中，所述细胞外基质薄层由以下方式制备： 将可食用植物切割为小片，用5% 15%十二烷基硫酸钠浸泡 2 4天，再用0.1% 0.3% ~ ~ ~ TritonX‑100浸泡1 3天，经水洗、灭菌备用。 ~ [0010] 在本公开进一步的方案提供的方法中，所述肌肉前体细胞和所述脂肪细胞的混合 比例为1.5:1 10:1。 ~ [0011] 在本公开进一步的方案提供的方法中，在所述步骤II中，进行3D培养扩增时所用 的培养液中含有5 10 ng/ml的Jagged1多肽。 ~ [0012] 在本公开进一步的方案提供的方法中，在所述步骤III中，细胞肉培养薄层叠加的 层数为4 6层。 ~ [0013] 在本公开进一步的方案提供的方法中，在所述步骤III中，将多个所述细胞肉培养 薄层叠加，用生长培养液培养3 5天，然后用成肌分化培养液培养4 6天。 ~ ~ [0014] 在本公开进一步的方案提供的方法中，所述生长培养液含有5 10 ng/ml的 ~ Jagged1多肽，所述成肌分化培养液含有4 8 ng/ml的follistatin 344蛋白。 ~ [0015] 发明的效果 综上所述，本发明具备以下优点： 1、本发明利用特定细胞贴壁性质的差异，从组织中分离肌肉前体细胞、脂肪前体 细胞，操作简便快速，目标细胞收率高，分离出的细胞具有良好的活性。 [0016] 2、本发明以植物来源的细胞外基质作为动物细胞生长和分化的载体，可有效承载 肌肉和脂肪细胞的培养，成本低，来源广泛，制备方便。 [0017] 3、本发明将脂肪细胞和肌肉细胞共培养，有效地改善了细胞培养肉的口感和营 养。 [0018] 4、本发明分离得到的前体细胞更多地保留了体内原始组织的生物学特征和生物 营养成分，且不需要外源转基因成分的辅助，节省了诱导干细胞转化的过程，用时少，成本 低。 [0019] 5、本发明在细胞培养的不同LONG8官方入口阶段针对性地使用特定的培养液，在培养前期保持前 体细胞的生长分化潜力，促进细胞快速分裂生长，在培养后期促进肌肉纤维快速成熟和增 大，实现了细胞培养在时间和空间上的协调。 [0020] 6、本发明提供的细胞培养肉的生产过程符合动物福利，细胞肉产品卫生可靠，营 4 4 CN 117004555 A 说明书 3/6 页 养全面，为宠物食品提供了更安全、健康和环保的选择。 附图说明 [0021] 参考以下附图，根据一个或多个不同实施例对本公开进行详细描述。 提供的附图 是为了便于理解本公开，而不应认为是对本公开的广度、范围、尺寸或适用性的限制。为了 便于说明，附图不一定按比例绘制。 [0022] 图1为实施例1体外分离培养的田鼠的肌肉和脂肪前体细胞的光镜图像。 [0023] 图2为实施例1的田鼠细胞在体外长成肌肉组织的Masson三色染色图。 [0024] 图3为实施例2的大鼠细胞在体外长成肌肉组织的Masson三色染色图。 实施方式 [0025] 本发明提供一种生产细胞培养肉的方法，包括以下步骤： I. 获得肌肉前体细胞和脂肪前体细胞 肌肉前体细胞、脂肪前体细胞可分别从动物的肌肉组织、脂肪组织获取。所述动物 可以是啮齿类动物，包括但不限于田鼠、大鼠、小鼠、豚鼠等。组织供体优选健康的年轻动物 个体。动物经适当麻醉或人道处死后，常规地进行表面消毒，分离出所需的组织，例如肌肉 组织、脂肪组织。 [0026] 将肌肉组织剪碎，进行酶解。细胞解离后，除去碎片，将细胞悬液接种在胶原蛋白 2 包被的培养皿或培养瓶中。其中，对于培养器皿的表面处理，优选每75cm 的培养面积以4~ 8ml的0.1 0.3%胶原蛋白溶液进行包被，可获得较好的细胞差异性贴附效果。将培养的细胞 ~ 置于二氧化碳细胞培养箱中，接种2 4小时后，一般成纤维细胞会快速贴壁，此时的未贴壁 ~ 细胞包含肌肉母细胞和干细胞等细胞。将含有未贴壁细胞的培养液转移到另一个胶原蛋白 包被的培养容器中，继续培养24 36小时后，肌肉母细胞和干细胞等会发生贴壁，洗去未贴 ~ 壁细胞，保留贴壁生长的细胞，即为具有高效肌肉分化能力的前体细胞（包括肌肉干细胞和 肌肉母细胞等，以下统称为肌肉前体细胞，muscle progenitor cell, MPC）。通常而言，保 留的这些贴壁较慢的细胞约占总细胞数的20%，包含95%以上的肌肉前体细胞。将所得的肌 肉前体细胞进行常规2D表面培养，适时传代，初步扩增肌肉前体细胞。 [0027] 将脂肪组织剪碎，进行酶解。细胞解离后，除去碎片，将细胞悬液接种在胶原蛋白 包被的培养器皿中。接种6 12小时后，洗去未贴壁细胞，保留贴壁生长的细胞，即为具有高 ~ 效脂肪细胞分化能力的脂肪前体细胞（adipose tissue‑derived stromal cells, ADSCs）。保留的这些贴壁较快的细胞约占总细胞数的50%，包含95%以上的脂肪前体细胞。将 所得的脂肪前体细胞进行常规2D表面培养，适时传代，初步扩增脂肪前体细胞。 [0028] 利用肌肉前体细胞较慢地贴壁 （胶原蛋白表面）生长的特性，可快速高效地将肌肉 前体细胞与肌肉组织内快速贴壁生长和不贴壁生长的其它细胞分离；利用脂肪前体细胞较 快地贴壁 （胶原蛋白表面）生长的特性，可快速高效地将脂肪前体细胞与脂肪组织内慢速贴 壁生长和不贴壁生长的其他细胞分离。此筛选过程温和，对肌肉前体细胞、脂肪前体细胞的 损伤小，所得的肌肉前体细胞、脂肪前体细胞有良好的活力。 [0029] II. 获得细胞肉培养薄层 本步骤中，将步骤I获得的肌肉前体细胞和脂肪前体细胞导入细胞外基质薄层，进 5 5 CN 117004555 A 说明书 4/6 页 行大规模的细胞培养扩增。 [0030] 其中，细胞外基质薄层来源于植物，特别是可食用的植物，例如菠菜叶、葡萄叶等。 来源于可食用植物的细胞外基质成本低廉，来源广泛，可安全地供宠物食用，并可为细胞肉 产品提供膳食纤维成分。 [0031] 一种示例性的制备细胞外基质薄层的方法是：将可食用植物切割为适当尺寸的小 2 片（例如，表面积1 2cm ），用5% 15%十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate，SDS）浸泡 ~ ~ 2 4天，再用0.1% 0.3% TritonX‑100（曲拉通）浸泡1 3天，得到去细胞的细胞外基质薄层。 ~ ~ ~ 经水洗和高压灭菌备用。细胞外基质薄层的厚度优选2 5mm，可在结构强度和物质交换效率 ~ 之间取得较好平衡。 [0032] 本步骤中，取步骤I所得的肌肉前体细胞和脂肪前体细胞，以一定比例混合后导入 细胞外基质薄层，利用细胞外基质薄层的立体结构进行细胞3D培养扩增。其中，优选取用的 肌肉前体细胞和脂肪前体细胞处于对数生长期，传代次数4 6代，细胞扩增培养的状态较 ~ 好。 [0033] 肌肉前体细胞和脂肪前体细胞的比例可根据目标产品的需求选择，例如1 .5:1 ~ 10:1；优选3:1 9:1，可较好地模拟天然肉品中肌肉和脂肪的成分比例；特别优选4:1 ~ ~ 5:1，更有益于营养均衡，避免宠物肥胖引起的健康问题。 [0034] 优选地，向基础培养液中添加Jagged1多肽（510 ng/ml），用作细胞3D培养扩增使 ~ 用的培养液。加入Jagged1多肽可诱导肌肉前体细胞保持细胞特性，防止肌肉前体细胞的干 性丢失，并促进细胞快速生长。 [0035] 经过细胞3D培养扩增，得到细胞肉培养薄层。优选细胞3D培养扩增进行5 8天，此 ~ 时细胞肉培养薄层具有适当的细胞密度和立体分布。 [0036] III. 获得细胞培养肉 取上一步骤所得的细胞肉培养薄层，将多片细胞肉培养薄层叠加摞在一起。叠加 的层数优选4 6层。加入生长培养液，静置培养3 5天，然后将培养液更换为成肌分化培养 ~ ~ 液，继续培养4 6天，得到细胞培养肉。 ~ [0037] 其中，所述生长培养液是向基础培养液中添加Jagged1多肽 （510 ng/ml）而配制 ~ 成的培养液；所述成肌分化培养液是向基础培养液中添加follistatin 344蛋白 （48ng/ ~ ml）而配制成的培养液。肌肉生长抑制素 （myostatin）可抑制肌肉细胞的生长和分化，限制 肌肉成长上限 ，而follistatin 344蛋白可抑制myostatin的活性，明显促进肌肉纤维的快 速成熟和增大，从而得到成熟粗壮的肌肉纤维，改善细胞培养肉的质感。 [0038] 本步骤中，通过适时构建培养物的空间结构、使用特定的培养液，可促进细胞恰当 地生长和分化，形成稳定成熟的肌肉细胞立体多层结构。所得的细胞培养肉良好地模拟了 天然肉类的外观和微观结构。 [0039] 以上各步骤中，所述的基础培养液可以是各种适合肌肉、脂肪前体细胞的培养液， 例如 ：添加了胎牛血清（最终体积分数10 20%，优选15%）、鸡胚胎精华提取物（chicken ~ embryo essential extracts, CEE，最终体积分数0.5% 2%，优选1%）的DMEM细胞培养基，或 ~ 源自Essential 8TM xeno‑free配方的培养液。在不同的培养阶段，可按前文所述向基础培 养液中添加其他成分。 [0040] 下面将结合实施例对本公开的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 6 6 CN 117004555 A 说明书 5/6 页 理解，下列实施例仅用于说明本公开，而不应视为对本公开的范围的限定。实施例中未注明 具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者， 均为可以通过市购获得的常规产品。 [0041] 实施例1：利用田鼠的高活性肌肉和脂肪前体细胞生产细胞培养肉 1.筛选获得高活性的田鼠肌肉前体细胞 ：取本地田鼠 （约3个月鼠龄）后肢的肌肉 组织约5克，通过酶解等程序分离出肌肉原代细胞。根据肌肉前体细胞在胶原蛋白铺层的表 面较慢贴壁的特性进行分离筛选，保留24小时之后贴壁的细胞，即为肌肉前体细胞（图1左 图）。 [0042] 2.筛选获得高活性的田鼠脂肪前体细胞：取本地田鼠 （约3个月鼠龄）腹部的脂肪 组织约5克，通过酶解等程序分离出脂肪原代细胞。根据脂肪前体细胞在胶原蛋白铺层的表 面较快贴壁的特性进行分离筛选，保留6小时之内贴壁的细胞，即为脂肪前体细胞（图1右 图）。 [0043] 2 3.获得脱细胞的植物细胞外基质薄层：将菠菜叶处理为约2cm 的小块，以10% SDS 浸泡3天去除细胞，再用0.3% TritonX‑100浸泡1天，得到去细胞的细胞外基质薄层。水洗、 灭菌后备用。 [0044] 4.获得细胞外基质的细胞肉培养层：将处于对数生长期的肌肉前体细胞和脂肪前 体细胞 （第四代）以5:1的比例混合，导入菠菜叶细胞外基质薄层，利用这种3D细胞外基质进 行大规模的细胞培养扩增。培养液中加入Jagged1 多肽（10 ng/ml），从而诱导肌肉前体细 胞保持细胞特性和加快生长。如此培养5天。 [0045] 5.获得分化为成熟肌肉纤维细胞的立体结构组织（细胞培养肉）：用细胞铲将细胞 肉培养层单层从培养液中取出，铺于新的培养盘中，层层叠加将细胞单层摞在一起5层，加 入含有Jagged1多肽的细胞培养液继续静置培养4天，然后向培养细胞的立体多层结构加入 肌肉细胞成肌分化培养液继续培养5天，形成细胞培养肉。培养结束后收取产生的细胞组织 进行形态和细胞分化程度的检测鉴定，结果表明有成熟肌肉纤维结构的形成（图2）。 [0046] 实施例2：利用大鼠的高活性肌肉和脂肪前体细胞生产细胞培养肉 1.筛选获得高活性的大鼠肌肉前体细胞 ：取实验室大鼠 （约5个月鼠龄）后肢的肌 肉组织约10克，通过酶解等程序分离出肌肉原代细胞。根据肌肉前体细胞在胶原蛋白铺层 的表面较慢贴壁的特性进行分离筛选，保留36小时之后贴壁的细胞，即为肌肉前体细胞。 [0047] 2.筛选获得高活性的大鼠脂肪前体细胞：取实验室大鼠 （约5个月鼠龄）腹部的脂 肪组织约10克，通过酶解等程序分离出脂肪原代细胞。根据脂肪前体细胞在胶原蛋白铺层 的表面较快贴壁的特性进行分离筛选，保留12小时之内贴壁的细胞，即为脂肪前体细胞。 [0048] 2 3.获得脱细胞的植物细胞外基质薄层：将菠菜叶处理为约2cm 的小块，以10% SDS 浸泡3天去除细胞，再用0.3% TritonX‑100浸泡1天，得到去细胞的细胞外基质薄层。水洗、 灭菌后备用。 [0049] 4.获得细胞外基质的细胞肉培养层： 将处于对数生长期的肌肉前体细胞和脂肪 前体细胞 （第四代）以10:1的比例混合，导入菠菜叶细胞外基质薄层，利用这种3D细胞外基 质进行大规模的细胞培养扩增。培养液中加入Jagged1 多肽（5 ng/ml），从而诱导肌肉前体 细胞保持细胞特性和加快生长。如此培养5天。 [0050] 5.获得分化为成熟肌肉纤维细胞的立体结构组织（细胞培养肉）：用细胞铲将细胞 7 7 CN 117004555 A 说明书 6/6 页 肉培养层单层从培养液中取出，铺于新的培养盘中，层层叠加将细胞单层摞在一起5层，加 入含有Jagged1多肽的细胞培养液继续静置培养 4天，然后向培养细胞的立体多层结构加 入肌肉细胞成肌分化培养液继续培养6天，形成细胞培养肉。培养结束后收取产生的细胞组 织进行形态和细胞分化程度的检测鉴定，结果表明有成熟肌肉纤维结构的形成（图3）。 [0051] 由以上实施例可见，本发明利用不同细胞贴壁性质的差异，从来自动物个体的原 代细胞分离出高活性的肌肉前体细胞和脂肪前体细胞。相比于常规的肌肉干细胞的分离纯 化程序，本发明分离肌肉干细胞的过程成本低、效率高，并可从同等量的组织中分离更多的 目标细胞，分离过程对细胞损伤小，分离出的肌肉前体细胞保持强大的细胞成肌分化能力， 可高效率地生长和分化，形成结构稳定的肌肉立体结构。 [0052] 本发明分离高活性脂肪前体细胞的方法同样也具有高效率的优势。另外，相较于 使用多能或全能干细胞分化形成脂肪前体细胞, 本发明由动物脂肪组织分离培养得到的 脂肪前体细胞更多地保留了体内原始组织的生物学特征和生物营养成分，且不需要外源转 基因成分 （如oct4/sox2 等细胞转录因子的基因及病毒等载体）的辅助，节省了诱导干细胞 转化为脂肪前体细胞的过程，需时较少，成本较低。 [0053] 本发明以植物来源的细胞外基质作为动物细胞生长和分化的载体，它既有一定的 结构强度，又可为细胞生长提供尺度适宜的立体环境，有效承载肌肉和脂肪细胞的培养，同 时还具有低成本、来源广泛和制备方便等优势。 [0054] 本发明将脂肪细胞和肌肉细胞共培养，改善了细胞培养肉的营养和口感。在细胞 培养的特定阶段使用添加了Jagged1多肽片段的培养液，有效激活前体细胞的Notch信号通 道，从而更好地保持前体细胞的特性（生长分化潜力），让肌肉细胞的体积、生长和分化都更 有潜力，分化成的肌肉纤维更粗壮。 [0055] 虽然已经参考优选实施例详细地示出和描述了本发明的特征，但是本领域技术人 员将理解，在不脱离本发明的范围的精神的情况下，可以在其中进行其他改变。本公开不限 于所示出的示例性方法或配置，而是可以使用各种替代方法和配置来实现。另外，尽管以上 根据各种示例性实施例和实现描述了本公开，但是应当理解，在一个或多个单独实施例中 描述的各种特征和功能不限于它们对于它们所属的特定实施例的适用性的描述。相反，它 们可以单独地或以某种组合方式应用于本公开的一个或多个其他实施例，无论是否描述了 这样的实施例，以及这些特征是否被呈现为所描述的实施例的一部分。因此，本公开的广度 和范围不应受任何上述示例性实施例的限制。 8 8 CN 117004555 A 说明书附图 1/2 页 图 1 图 2 9 9 CN 117004555 A 说明书附图 2/2 页 图 3 10 10
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