•可用于测定正常(WI‐38)和转化(鼠‐L和HeLa)细胞单层的生长反响
•DMEM是由根底Eagle培养基(BME)改进而来，含有4倍浓度的氨酸酸和
细胞培养基是以动物细胞大规模培养为技术平台，研发及细胞培养基是以动物细胞大规模培养为技术平台，研发及
““培养基虽不是细胞培养中唯一重要因素，但确实是最培养基虽不是细胞培养中唯一重要因素，但确实是最
————WurmWurm博士，瑞士联邦科技学会生物工艺博士，瑞士联邦科技学会生物工艺
20212021年全球生物制药市场销售额为年全球生物制药市场销售额为16001600亿，占据全球制药份额的亿，占据全球制药份额的
预计预计20212021年生物制药产品的销售额将超过年生物制药产品的销售额将超过24002400亿亿
生物制药在制药行业比重的增加决定着细胞培养基市场的不断扩大与生物制药在制药行业比重的增加决定着细胞培养基市场的不断扩大与
开展，而生物制药行业的开展趋势也决定着细胞培养基市场的开展趋开展，而生物制药行业的开展趋势也决定着细胞培养基市场的开展趋
全球利用生物反响器大规模培养动物细胞生产生物制品的普及率到达全球利用生物反响器大规模培养动物细胞生产生物制品的普及率到达
80%80%，均使用个性化〔或定制〕的细胞培养基。，均使用个性化〔或定制〕的细胞培养基。
个性化配方〔属于非公开、商业秘密〕的细胞培养基占世界主要细胞个性化配方〔属于非公开、商业秘密〕的细胞培养基占世界主要细胞
无血清无动物来源成分细胞培养有逐渐取代传统的加血清培养方式的无血清无动物来源成分细胞培养有逐渐取代传统的加血清培养方式的
细胞培养基实际上就是生物技术产业的细胞培养基实际上就是生物技术产业的
FDA FDA将细胞培养基产品列为医疗器械中的 将细胞培养基产品列为医疗器械中的ⅡⅡ
类器械。大多数在美国进展商业销售的医疗 类器械。大多数在美国进展商业销售的医疗
器械都是通过上市前通告 器械都是通过上市前通告[510(k)] [510(k)]的形式 的形式
得到批准的，对 得到批准的，对ⅡⅡ类医疗器械产品〔占 类医疗器械产品〔占
46% 46%左右〕，实行的是特殊控制，即企业 左右〕，实行的是特殊控制，即企业
在进展注册和列名后，还需实施 在进展注册和列名后，还需实施GMP GMP和递 和递
在欧盟，细胞培养基产品作为一种由多种 在欧盟，细胞培养基产品作为一种由多种
成分混合组成的物质，必须向欧洲化学品 成分混合组成的物质，必须向欧洲化学品
管理局〔 管理局〔ECHA ECHA〕注册，才能获准得进入 〕注册，才能获准得进入
台湾生物制药企业对细胞培养基生产企业 台湾生物制药企业对细胞培养基生产企业
依据台湾 依据台湾??药品优良制造标准 药品优良制造标准— —原料药作 原料药作
业基准 业基准??以及国际医药品稽查协约组织〔 以及国际医药品稽查协约组织〔
PIC/S PIC/S〕〕 的规定对细胞培养基厂商进展 的规定对细胞培养基厂商进展
cGMP cGMP稽核，要求多达 稽核，要求多达 179 179项条款 项条款
国内抗体制药企业向美国申报新药的资料 国内抗体制药企业向美国申报新药的资料
在华销售的国外企业〔包括进口分装〕： 在华LONG8官方入口销售的国外企业〔包括进口分装〕：66家左右 家左右
进口分装培养基，分装后未经检验就销售 进口分装培养基，分装后未经检验就销售
缺少相关专业学历或资质的生产和质量管理人员 缺少相关专业学历或资质的生产和质量管理人员
检验条件缺乏，不具备细胞培养基产品全部质量指标的检验条件， 检验条件缺乏，不具备细胞培养基产品全部质量指标的检验条件，
−− 目前，培养基即不属于药品，也不属于按药品管理的辅料，国家对细胞培养基没 目前，培养基即不属于药品，也不属于按药品管理的辅料，国家对细胞培养基没
有强制性质量标准，也未列入药品生产管理范畴 有强制性质量标准，也未列入药品生产管理范畴
动物细胞可以耐受的体外环境的各种成分的范围比较窄 动物细胞可以耐受的体外环境的各种成分的范围比较窄
〔下表〕，所以对与之相关的培养基的质量有必要进展严 〔下表〕，所以对与之相关的培养基的质量有必要进展严
细胞类型不同，采用的培养基类型也有差异 细胞类型不同，采用的培养基类型也有差异
同时，含抗生素，细胞生长不需要，但用于控制细菌污染 同时，含抗生素，细胞生长不需要，但用于控制细菌污染
此外，多数培养基含有 此外，多数培养基含有pH pH 指示剂，酚红 指示剂，酚红
等。在大多数细胞的膜上存在的是 等。在大多数细胞的膜上存在的是Glut1 Glut1单糖转运载体，同时也有一 单糖转运载体，同时也有一
定数量的 定数量的Glut2,Glut3 Glut2,Glut3等，负责转运其他不同种类的单糖，如果添加 等，负责转运其他不同种类的单糖，如果添加
其他种类的单糖有助于调节 其他种类的单糖有助于调节glucose glucose的的转转运速度，降低 运速度，降低lactate lactate的生成 的生成
，维持 ，维持pH pH稳态。但是 稳态。但是Glut5 Glut5仅LONG8官方入口存在于一些特殊种类的细胞上，负责转 仅存在于一些特殊种类的细胞上，负责转
一般采用碳酸氢根〔 一般采用碳酸氢根〔HCO3 HCO3‐‐〕，与培养环境中的 〕，与培养环境中的CO2 CO2
通常会向培养基中添加有机缓冲剂 通常会向培养基中添加有机缓冲剂HEPES HEPES〔〔pH 7.0 pH 7.0〕〕
国家化工行业标准 国家化工行业标准??哺乳类动物细胞培养基 哺乳类动物细胞培养基??〔〔HG/T 3935 HG/T 3935--2007 2007〕中的 〕中的
哺乳细胞无血清培养基应符合 哺乳细胞无血清培养基应符合以下 以下技术要求 技术要求
考虑到生物制品的质量和平安性对细胞培养基这种原材料 考虑到生物制品的质量和平安性对细胞培养基这种原材料
的要求，个人认为，假设条件许可，应增加了对细胞培养 的要求，个人认为，假设条件许可，应增加了对细胞培养
基中支原体污染、牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量检 基中支原体污染、牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量检
称取每升标示量的实验室样品，置于 称取每升标示量的实验室样品，置于1L 1L烧杯中，加水 烧杯中，加水1L 1L，，
搅拌至溶解，按中华人民共和国药典 搅拌至溶解，按中华人民共和国药典2021 2021版二部附录 版二部附录IX IX
称取每升标示量的实验室样品，置于 称取每升标示量的实验室样品，置于1L 1L烧杯中，加水 烧杯中，加水1L 1L，，
搅拌至溶解，按中华人民共和国药典 搅拌至溶解，按中华人民共和国药典2021 2021版二部附录 版二部附录VI VI
中华人民共和国药典 中华人民共和国药典2021 2021版二部附录 版二部附录VIII L VIII L枯燥失重测定 枯燥失重测定
称取每升标示量的实验室样品，置于 称取每升标示量的实验室样品，置于1L 1L烧杯中，加水 烧杯中，加水1L 1L，，
搅拌至溶解，按中华人民共和国药典 搅拌至溶解，按中华人民共和国药典2021 2021版二部附录 版二部附录IX IX
取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行 取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行
测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的 测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的
按中华人民共和国药典 按中华人民共和国药典2021 2021版二部附录 版二部附录XI E XI E细菌内毒素 细菌内毒素
按中华人民共和国药典 按中华人民共和国药典2021 2021版二部附录 版二部附录XI J XI J微生物限度检查 微生物限度检查
法进展，检查工程为细菌数、霉菌数。检查法采用平皿法。 法进展，检查工程为细菌数、霉菌数。检查法采用平皿法。
称取实验室样品 称取实验室样品1g 1g，准确至 ，准确至0.01g 0.01g，参加无菌纯化水 ，参加无菌纯化水10ml 10ml
按中华人民共和国药典 按中华人民共和国药典2021 2021版二部附录 版二部附录XI E XI E细菌内毒素检 细菌内毒素检
7.1 7.1 方法提要〔以无血清培养基为例〕 方法提要〔以无血清培养基为例〕
本试验所用器具及溶液均为无菌，试验操作过程均为无菌操 本试验所用器具及溶液均为无菌，试验操作过程均为无菌操
细胞在 细胞在37 37℃℃恒温条件下，在不含血清的细胞培养中生长 恒温条件下，在不含血清的细胞培养中生长168 168
hh，观察细胞形态并进展细胞计数，计算存活率。 ，观察细胞形态并进展细胞计数，计算存活率。
CO2 CO2培养箱：能在 培养箱：能在37 37±±11℃℃恒温。 恒温。
取一定量的细胞悬液，离心，去上清，用 取一定量的细胞悬液，离心，去上清，用PBS PBS溶液洗细胞一 溶液洗细胞一
次，离心，参加适量的待测培养液重悬。 次，离心，参加适量的待测培养液重悬。
每个样品接种 每个样品接种33瓶，细胞接种密度均为 瓶，细胞接种密度均为33××105cells/ml 105cells/ml，活 ，活
养养168h 168h。每 。每24h 24h取样检测，在显微镜下观察细胞形态是否正 取样检测，在显微镜下观察细胞形态是否正
常，并进展细胞计数，计数方法同 常，并进展细胞计数，计数方法同6.7.4.1 6.7.4.1，计算各时间点 ，计算各时间点
每毫升悬液的总细胞数、活细胞数以及细胞活率。 每毫升悬液的总细胞数、活细胞数以及细胞活率。
根据细胞量确定稀释倍数，再根据稀释倍数取适量悬液稀释， 根据细胞量确定稀释倍数，再根据稀释倍数取适量悬液稀释，
同时以 同时以0.4% 0.4%台盼蓝染色液染色，染色 台盼蓝染色液染色，染色33分钟〔不能超过 分钟〔不能超过10 10
稀释后的样品在血球计数板四个大方格中的细胞数应该保证 稀释后的样品在血球计数板四个大方格中的细胞数应该保证