营养琼脂(普通琼脂) 成份:牛肉浸液(或其它浸液,消化液或肉膏汤)100亳升 琼脂(视天气,琼脂质量而定) 制法:将上物加热溶解,补足水,调ph至7. 6,过滤分装12VC,高压灭菌15分钟。 用途:作普通琼脂平皿。 血琼脂平板(BA) 制法:取营养琼脂(PH7. 6),加热使其溶解待冷至45?50°C,以灭菌操作于每100毫升营 养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5?10毫升,轻轻龙8娱乐平台摇匀,立即倾注于平板或分装试管,制成斜 面备用。 用途:1?一般棉拭了均接种此培养基。 尿液,脓液 分离细菌标木用。 基础培养基(肉膏汤BB) 成份:蛋白豚10克牛肉膏5克 氯化钠5克水1000亳升 制法:将以上各物称好,加水煮沸溶解,用1NNOH校正PH至7. 6,过滤分瓶,121°C高 压灭菌,20分钟备用。 用途:1作耐药试验,增菌用分装小管。 2作普通琼脂斜面。 血液培养基(大管肉汤培养基) 成份:1新鲜牛肉浸液1000毫升 PABA (对氨基苯甲酸(相当于 伽g/毫升))1g% 1毫升 MgSO4 [相当于 0. 493/100 毫升]49. 3% 1 毫升 4枸椽酸钠0. 3g 制法:1将1号,4号混合液,2号,3号液分装高压灭菌。 2取灭菌1, 4号混合液用无菌法加入PABA, MgSO4,再分管,行无菌试验三天方可使用。 用途:作血,骨髓培养用。 肠道杆菌培养基(伊红美兰琼脂) 成份:蛋刚东10克乳糖10克 氯化钠5克琼脂25 (22)克 水1000毫升2%伊红溶液20毫升 0. 5%美兰溶液20毫升 制法:将蛋白腺,氯化钠琼脂称好,加水1000毫升使溶解,校正PH7. 4过滤,补足失水, 加入2%伊红溶液20毫升,0. 5%美兰溶液20毫升,(115°C高压20分钟),冷却至50°C 左右倾注平板,凝固后存冰箱备用。(高压以后方可再加乳糖) 用途:用作分离沙门氏,志贺氏菌属,也作菌群调查。 1 罗文斯坦培养基 成份:磷酸二氢钾2?4克硫酸镁0. 24克 枸椽酸钠0. 6克天门冬素3. 6克 纯甘油(丙三醇)12毫升水600毫升 马铃薯粉30克 鸡蛋1000毫升(约3公斤) 2%孔雀绿水溶液20毫升 制法:1除鸡蛋外(还有孔雀绿)。可将其它物品称好,放入大三角瓶包扎好,高压灭菌。 2鸡蛋用75%酒精泡30分钟,火菌法打蛋,倒入盛行玻璃珠的火菌三角烧瓶内充分将鸡蛋 摇散。 3将各成份按比例配好,分装每管约5毫升。 4间歇灭菌第一次90°C1小时,第二次80°C半小时,第三次80°C半小时(或放85°C烤箱 内连续二次)。 质控标准:1灭菌试验合格。 2接种结核杆菌要求两星期生长良好。 用途:作结核分枝杆菌培养用。 结核半固体培养基 成份:磷酸氢二钠19克硫酸镁0. 6克 磷酸二氢钾2. 5克天门冬素5克 1%孔雀绿1?5克甘油20毫升 吐温80 (10%) 5毫升 水1000毫升 枸椽酸钠2. 5克动物血清100毫升 琼脂1. 5克(80小时用甲醇去脂) 1%孔雀绿0. 78毫升 吐温80 (10%) 5毫升 加动物血清100毫升 制法:1除血清外将上述药品均称好,放入煮沸溶解,调PH7。2 2分管(每管约10毫升)包扎好,高压,半小时灭菌。 3待冷后无菌法加无菌血清(绵羊血或兔血)每管约1毫升备用。 4去除琼脂方法:取琼脂若干或于三角烧瓶屮加中醇于琼脂1毫升用塞密封,放37°C温浴 80小时,每天摇动一次,冷却后到时取出用滤纸过滤,待琼脂自然冷却后备用。 质控标准:1无菌实验合格。 2琼脂硬度合适而清亮。 3接种标准结核杆菌用,强度合适即可用。 用途:培养结核杆菌用。 亚硏酸钾血琼脂平板 成份:琼脂基础100毫升10%匍萄糖2毫升 %亚确酸钾4. 5毫升 绵羊血10毫升 制法:1将琼脂基础溶解好,加入羊血。 2马上加热使成咖啡色示,稍冷再加入10%葡萄糖2亳升与1%亚硏酸4?5亳升混合后倒 入无菌平板, 2 凝固后存冰箱备用。 质控标准:接种白喉杆菌生长良好,其它革兰氏阴性菌均抑制生长。 用途:供培养及鉴别白喉杆菌用。 米培养基 成份:白米20克水1000毫升 琼脂20克吐温80 10毫升 制法:1将20克米加水200毫升点沸45分钟,点时将容器盖好。 2用纱布过滤,只要米汤,不要饭,加水至1000亳升。 3加琼脂20克,吐-80 10毫升煮溶,分装中型管(每管约3毫升),包扎好,高压,121 °C 半小时,消毒备用。 质控标准:1灭菌。 2要求清亮。 3接种白色念珠菌17?24小时生长良好,并产生厚膜砲子。 用途:培养白色念珠菌用。 蛋白豚水培养基 成份:蛋白豚1克氯化钠0. 5克 水加至100毫升PH调至7. 8 制法:把以上各物称好溶于水,调节PH7. 6分装消毒备用。 质控标准:1放置37°C无菌生长。 2接种大肠杆菌24小时生长良好。 3可作屮国兰平板基础液。 可作靛基质基础液(作此试验需要色氨酸蛋白豚)。 血培养基 成份:蛋白腺10克牛肉膏5克 氯化钠5克葡萄糖3克 枸椽酸钠3克MgSO4。7H2O 20亳升 0. 5%PABA 10毫升 酵母浸液10毫升0. 2克(2%过滤) 俩红0?4% 6毫升水1000毫升 琼脂0. 5克 *:作大BB,小BB时,不要加酚红和琼脂。 制法:1。除PABA、硫酸镁、酚红外均称好点化调PH7. 4 2。 调好PH后再加酚红。 3。 硫酸镁、PABA另外无菌再加入(亚细,小BB) 沙氏培养基 成份:蛋白豚1克水100毫升 琼脂1?5克(琼脂粉1克%)葡萄糖或麦芽糖4克 3 制法:1将上述物质称好,放入水屮煮沸溶解(不必调PH即有5左右)分屮号试管(约4 毫升)包扎,高压115°C20分钟。 2趁热斜好,凝固备用。 质控标准:1无菌试验合格。 2接种霉菌比在其它培养基上生长良好,其它菌生长不好。 用途:作分离培养霉菌用。 注意:1接种临床新鲜标木可先加「2滴70%酒精让干后再接种于含12. 5%氯霉素沙氏 斜面培养基上。 2也可用蜂蜜8克代替葡萄糖或麦芽糖。 肉渣培养基 成份:牛肉渣牛肉浸液(牛肉膏) 制法:将做牛肉浸液的牛肉渣,装入试管,高约3亳米,加入牛肉浸液或牛肉膏汤(PH7. 6) 约5毫升,比肉渣高一倍,液面上加入已溶解的凡士林,高约0?5厘米(不加也可),12VC 高压灭菌20?30分钟后保存于冰箱内备用。 用途:用于厌氧菌培养。 注意:如无肉渣也可用牛、羊血等代替,将血块先放入水内煮沸,取岀成小块,血块在加热 后摇匀成碎颗粒状。 相关疾病: TOC \o 1-5 \h \z 12L MS m ? 脑膜炎 单糖发酵管培养基(半固体) 成份:PH7. 6-7. 8蛋白豚水1000毫升(0?3克/100毫升) 1. 2%酚红液0. 4毫升 琼脂0. 4 - 0. 5克 10%糖或醇10毫升 制备:把蛋白月东水,琼脂加热溶解,然后加1. 2%酚红液0. 4毫升,10%糖10毫升,混匀, 分装试管,每管约2-3毫升,经115°C高压灭菌20分钟后,分置于试管架上,贴上各类糖 或醇类标签备用。 质控标准:细菌发酵糖类或醉而产生酸,能使培养基PH改变,指示剂由红变黄色,如因发 酵产生气体则 半固体内产生气泡,如有动力则半固体由清亮变混浊。 明胶培养基 成份:肉浸液1000毫升(牛肉浸膏5克) 明胶12克 制法: 100亳升肉浸液屮,加入明胶12克,隔水加热煮化,校正PH7. 2,分装小号试管,用阿诺 氏间歇灭菌80°C30分钟,连续3日,或者108°C高压20分钟,冷却,贮存备用。 碱性蛋白豚水 成份: 蛋白豚20克氯化钠5克 硝酸钾0. 1克 结晶碳酸钠(NaclC03? 12H20) 0. 2克 水1000毫升 4 制法:将蛋白豚,Nacl,硝酸钾,结晶碳酸例称好,溶于1000DW屮,校正PH8. 4分装试管, 121°C高压 灭菌15分钟后备用。 用途:用于霍乱弧菌培养。 葡萄糖蛋白腺水(M° V用) 成份:蛋白腺5克葡萄糖5克 K2HP04 5克 水1000毫升 制法:将上述称好溶解分装试管,调PH7. 4高压灭菌115°C火菌20分钟,或者葡萄糖加 热煮沸后再倒试管 标准:灭菌试验合格。 接种大肠杆菌VP阴性,M阳性;接种产气杆菌VP阳性,M阴性。 用途:作鉴别肠道杆菌用。 枸椽酸盐培养基 成份:磷酸二氢钱0. 1克硫酸镁0. 02克 磷酸氢二钾0. 1克 枸椽酸钠0. 23—0. 5克(0. 36) 氯化钠0. 5克琼脂1. 5克 0. 5%漠麝香草酚兰2毫升(调PH6. 8再加) 制法:将上述称好,放入水屮点沸溶解,调PH6. 8,然后分装屮号试管,高压灭菌,趁热 倒呈斜面,凝固 后备用。 标准:1灭菌试验合格,培养基呈果绿色适宜。 2接种大肠杆菌,培养基上不生长,也不变色。 3接种产气杆菌,培养基呈深兰色。 用途:作鉴别大肠杆菌用。 双糖铁培养基 成份: 下层:蛋白豚1克氯化钠0. 5克 葡萄糖0. 2克琼脂0. 3-0. 5克 水100亳升 将上述物质混匀调PH7. 6后加1. 2%酚红0. 4毫升 上层:蛋白豚1克氯化钠0. 5克 乳糖1克硫代硫酸钠0. 03克 硫酸亚铁0?02克琼脂1克 水100毫升 制法:1将下层配好,分装屮号试管(1毫升),塞好包扎,15磅高压灭菌半小时,使凝 固后备用。 2制上层时,先将蛋白豚水制好,加入硫酸亚铁,硫代硫酸钠,加热溶解PII8. 1,再加入酚 红分瓶,(每瓶300毫升,称取琼脂包扎灭菌,趁热加入乳糖隔水煮沸30分钟或112°C消 毒15分钟)0 3取己制的下层管,每管用无菌法倒入上层液约lo 5毫升,边斜放置使成斜面,凝固后备 用。 标准:无菌试验合格,接种大肠杆菌下层产酸产气,上层产酸。 尿素培养基 成份:蛋白豚0. 1克氯化钠0. 5克 磷酸二氢钾0. 2克尿素0. 2克(或10%2毫升) 葡萄糖0?01克(或10%葡萄糖0. 1毫升) H20 100毫升酚红(0. 2%) 0. 4毫升 制法:1除葡萄糖,尿索外把其它药品称好放入水屮煮沸,使溶解,调PH7. 2过滤,15磅 高压灭菌15分钟. 2配制尿素(灭菌)液:每100毫升基液内加2毫升. 3配制10%葡萄糖(灭菌)每100毫升加0. 1毫升. 4分装小试管待用. 标准: 1灭菌试验合格. 2接种变形杆菌24小时呈红色. 用途:鉴定变形杆菌用. 胆盐中性红琼脂 成份:蛋白豚琼脂PH7. 2-7. 4 5000毫升 胆盐2. 5克 乳糖5. 0克 对氨基苯甲酸25毫克 1%屮性红溶液25毫升 制法: 将胆盐,对氨基苯甲酸,乳糖趁热加入已灭菌Z蛋白腺琼脂屮,待冷至50-60°C时,加入1% 屮性红液2. 5毫升,混合后即倾注平1UL,凝固待用. 1%中性红:1克中性红加酒精60毫升,加水40毫升 丙二酸盐培养基(缩苹果酸钠) 成份:丙二酸钠0. 3克酵母浸膏0. 1克 Nacl 0. 2克硫酸銭0?2克 K2HP04 0? 06 克 KH2P04 0? 04 克 水100毫升 PH6. 8,高压灭菌备用. 0. 2%漠麝香酚兰乙醉1. 25亳升 制法:与枸椽酸盐利用试验相类似,是测定细菌能否利川丙二酸盐与碳源.无机钱盐为姐源 而生长,生长者使培养基变成碱呈兰色. 鉴定:克氏杆菌(+)赫夫尼亚(+ ) 沙门氏菌(一)痢疾杆菌(一) 苯丙氮酸培养基 成份:酵母浸液1. 5克DL—苯丙氨酸1克 磷酸氢二钠(无水)0. 5克(或I厂苯丙氨酸0. 5克) 氯化钠2. 5克琼脂6克 水500毫升PH7. 4 制法:1将上述成份加热溶解,分装于12*125mm 口径的试管中,每管约4亳升. 2高压灭菌15磅10分钟,趁热使试管斜置凝固后备用. 3接种时划斜血. 用途:鉴定沙门氏菌用.苯丙氨酸脱氮酶试验沙门氏菌阴性. 双抗培养基 成份: 蛋白腺10克牛肉膏5克 氯化钠5克无水亚硫酸钠3克 柠檬酸钠10克蔗糖10克 琼脂粉20克水1000毫升 制法: 1将上物称好,加热溶于水屮. 2 调 PII8. 2—8. 4 3分装高压灭菌后备用. 倾注平板前先加热溶解琼脂等冷至50C左右,按无菌操作加入多、庆抗菌索充分摇匀,倾 注平板,凝固后备用. (庆大霉素:150u/毫升,多粘菌素:1500u/毫升,2毫升加至1000毫升培养基内,此相当 于庆大霉素0.:汕/亳升,多粘菌素:3u/毫升) 02培养基 保存液:(文一腊氏液) A 液:硼酸 12. 405 克 KCL 14. 912 克 水1000毫升 取A液250毫升0?8%NA0H 133. 5毫升 NACL 20克水1000毫升 分装高压灭菌. 硝酸盐豚水 成份: 蛋白豚1克 硝酸钾(无N02) 0. 1克 H20 100毫升 PH7. 4,高压火菌分装备用. (如无硝酸钾也可用硝酸钠0. 02克,NACL0. 05克,H20100毫升) 用途:硝酸盐还原试验用. 原理:测定细菌能否还原硝酸盐为亚硝酸盐,后者在酸性条件下与a—蔡胺和对氨基苯磺酸 发生重氮反应,生成红色的1-^-4偶氮苯对磺酸. 制法:试剂甲液A对氨基苯磺酸0. 8克溶于5N的醋酸100毫升. B:乙液8-蔡酚0?5克溶于5N的醋酸100毫升中 将细菌接种于硝酸盐水中37°C培养24~96小时,加入甲液0. 1毫升,再加入乙液数滴, 立即呈现红或紫色为阳性 king氏培养基(能促进绿脓菌绿色素产生) 成分: 蛋白腺2克K2S04 1克 甘油1克MGCL2 0. 14克 琼脂1.5克1120 100毫升 KING氏培养基(能促进绿脓菌荧光色产生) 成分: 蛋白月东2克甘油1克 K2S04 0. 15 克 MGS04 4. 7 克 H20 0. 15 克 琼脂1. 5克1120 100毫升 调PH7.2 15磅20分钟消毒示使成斜面备用. 七叶廿水解试验 原理: 粪链球菌能分解七叶廿(Escalin)其代谢产物与铁离了结合产生黑色沉淀,使培养基变黑. 方法: 将菌种接种在七叶廿或琼脂上37C18小时,观察结果,培养基变黑色,其他链球菌能生长 但不变黑色,肺炎链球菌不长. 成分: 七叶廿0.1克胰豚1. 5克 枸椽酸铁0. 2克 琼脂2. 0克(0. 5克/50毫升) 胆汁2. 5毫升H20 100毫升 PH7. 0分装小试管内高压灭菌后备用(10磅20分钟) 七叶昔又名桑树皮貳,七叶灵,Aesclin Escnlim Bicolorin等.为白色针状结晶.水溶液 兰色荧光.) 葡萄糖氧化发酵培养基(0/F) 成份: 蛋白腺2. 7克氯化钠5. 0克 0. 2%溟麝香酚兰0. 03克琼脂3克 KH2P04 0?3克 葡萄糖10. 0克 水1000亳升 制法:以上成份除糖外,溶解调PH7. 0, 10磅高压灭菌20分钟后备用. 方法:挑取少量培养物接种两管,其屮一管接种后加液体石腊不少于1厘米厚,两管同时 35°C,培养过夜, 观察颜色的变化,若无颜色变化,需继续观察七天,每LI观察刺层型别. 用途:适用于微球菌科和非发酵菌的鉴定. 麦康凯培养基 成份: 蛋白腺20克氯化钠5克
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