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大连大学医学院大连大学医学院 郑丛龙郑丛龙 细胞培养技术细胞培养技术绪绪论论 细胞培养技术细胞培养技术 这是一个真核细胞模型这是一个真核细胞模型这是一个真核细胞模型这是一个真核细胞模型这是一个真核细胞模型这是一个真核细胞模型Can you describe it?Can you describe it?Can you describe it?绪绪 论论 细胞培养的基本概念细胞培养的基本概念 细胞培养的发展简史细胞培养的发展简史 细胞培养的优缺点细胞培养的优缺点 细胞培养的应用领域细胞培养的应用领域细胞培养（细胞培养（cell culture)cell culture)细胞培养技术是选用各种细胞的最佳生细胞培养技术是选用各种细胞的最佳生存条件对活细胞进行体外培养和研究的技存条件对活细胞进行体外培养和研究的技术术即：从活体中取出小块组织分离出细胞，即：从活体中取出小块组织分离出细胞，在一定条件下进行培养，使之能继续生存、在一定条件下进行培养，使之能继续生存、生长、增殖的LONG8官方入口一种方法生长、增殖的一种方法细胞培养（细胞培养（cell culture)cell culture)是指用机械或化学的方法将组织分散成单个细胞是指用机械或化学的方法将组织分散成单个细胞而进行的培养。
而进行的培养组织培养（组织培养（tissue culture)tissue culture)是指把活体的组织取出分成小块，直接置于培养是指把活体的组织取出分成小块，直接置于培养瓶底或通过胶原纤维血浆支持物的培养瓶底来进行培养瓶底或通过胶原纤维血浆支持物的培养瓶底来进行培养其特点是：组织不失散，细胞保持原有的组织关系其特点是：组织不失散，细胞保持原有的组织关系器官培养（器官培养（organ cultureorgan culture）是将活体中器官或器官一部分取出，在体外生长、是将活体中器官或器官一部分取出，在体外生长、生存，并使其保持器官原有的结构和功能特征的培养生存，并使其保持器官原有的结构和功能特征的培养其特点是：培养的器官在合适的条件下能生长和分化，其特点是：培养的器官在合适的条件下能生长和分化，存活数周或存活数周或1年年体体外外培培养养种种类类细胞培养可分为群体培养和克隆培养两种细胞培养可分为群体培养和克隆培养两种群体培养（群体培养（mass culturemass culture）：）：即将大量细胞置即将大量细胞置于培养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均于培养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均匀的单层细胞或单细胞悬液。
匀的单层细胞或单细胞悬液克隆培养（克隆培养（clone cultureclone culture）：）：即将少数细胞加即将少数细胞加入培养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经入培养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经过繁殖每一个细胞形成一个集落，称为克隆过繁殖每一个细胞形成一个集落，称为克隆群体培养（左）和克隆培养（右）群体培养（左）和克隆培养（右）原代培养第原代培养第4 4天，成纤维样细胞散布于培养瓶底，个别集天，成纤维样细胞散布于培养瓶底，个别集落形成，细胞围绕中心漩涡状排列落形成，细胞围绕中心漩涡状排列100100原代培养第原代培养第7 7天，多个集落形成并融合天，多个集落形成并融合100100 组织培养常用术语组织培养常用术语 原代培养（原代培养（primary cultureprimary culture）：）：从直接取从直接取自生物体细胞、组织或器官开始的培养自生物体细胞、组织或器官开始的培养传代培养（传代培养（passage culturepassage culture）：）：将细胞以将细胞以一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传代培养称为传代培养。
注：传代（注：传代（passagepassage，subculturesubculture）细胞系（细胞系（cell linecell line）：）：原代培养经首次传代成功原代培养经首次传代成功后即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的后即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成细胞世系所组成细胞株（细胞株（cell straincell strain）：）：通过选择法或克隆形成通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的特殊性质或法从原代培养物或细胞系中获得的特殊性质或标志，并能稳定保持这些特性的培养物标志，并能稳定保持这些特性的培养物克隆（克隆（cloneclone）：）：指单个细胞通过有丝分裂所产指单个细胞通过有丝分裂所产生的遗传性状相同的细胞群体生的遗传性状相同的细胞群体细胞周期（细胞周期（cell cycle)cell cycle)：从上一次分裂结束至下一次从上一次分裂结束至下一次从上一次分裂结束至下一次从上一次分裂结束至下一次分裂终了结束经历的时相过程，由分裂间期和分裂期分裂终了结束经历的时相过程，由分裂间期和分裂期分裂终了结束经历的时相过程，由分裂间期和分裂期分裂终了结束经历的时相过程，由分裂间期和分裂期构成。
构成构成构成二倍体细胞系或株（二倍体细胞系或株（diploid cell line or strain)diploid cell line or strain)：具有二倍体核型的细胞系或株具有二倍体核型的细胞系或株具有二倍体核型的细胞系或株具有二倍体核型的细胞系或株有限细胞系或株：有限细胞系或株：指仅能有限传代次数，通常指仅能有限传代次数，通常5050代左右，然后衰亡代左右，然后衰亡无限细胞系或株：无限细胞系或株：具有无限增值能力的具有无限增值能力的细胞系或细胞系或细胞系或细胞系或株株株株细胞凋亡：细胞凋亡：指体内外因素触发导致的程序性细指体内外因素触发导致的程序性细胞自杀死亡胞自杀死亡干细胞（干细胞（stem cellstem cell）：）：指体内未分化的具有继续指体内未分化的具有继续分化潜能的细胞分化潜能的细胞细胞接触抑制（细胞接触抑制（cantactcantact inhibition inhibition）：）：贴壁生长贴壁生长的正常细胞一旦汇合、相互接触后变停止分裂的正常细胞一旦汇合、相互接触后变停止分裂细胞杂交（细胞杂交（cell cell hebridizationhebridization）：）：指指2 2个或多个个或多个细胞融合导致一个多核细胞。
细胞融合导致一个多核细胞有分化特性的细胞系和细胞株有分化特性的细胞系和细胞株组织来源组织来源细胞系细胞系增殖性增殖性物种物种分化特性分化特性脾脾Friend永生永生小鼠小鼠合成血红蛋白合成血红蛋白Morris肝癌肝癌HTC永生永生大鼠大鼠酪氨酸转移酶诱导酪氨酸转移酶诱导髓性白血病髓性白血病K562永生永生人人合成血红蛋白合成血红蛋白垂体瘤垂体瘤GH2,GH3永生永生大鼠大鼠产生生长激素产生生长激素黑色素瘤黑色素瘤B16永生永生小鼠小鼠产生色素产生色素髓性白血病髓性白血病HL60永生永生人人合成球蛋白合成球蛋白胶质瘤胶质瘤CCM永生永生人人胶质纤维酸性蛋白胶质纤维酸性蛋白成神经细胞瘤成神经细胞瘤C1300永生永生大鼠大鼠生长轴突生长轴突细胞培养的发展简史细胞培养的发展简史德国人德国人RouxRoux（18851885）用温生理盐水体外培用温生理盐水体外培养鸡胚组织神经板并存活数天，被认为是组养鸡胚组织神经板并存活数天，被认为是组织培养的萌芽试验织培养的萌芽试验19031903年年JollyJolly用盖片悬滴培养法，培养蝾螈用盖片悬滴培养法，培养蝾螈白细胞生活一月，提示组织或细胞离体后，白细胞生活一月，提示组织或细胞离体后，在人工培养条件下，仍能生存。
在人工培养条件下，仍能生存7年年年年HarrisonHarrisonHarrisonHarrison创建了创建了创建了创建了“哈里森悬滴培养法哈里森悬滴培养法哈里森悬滴培养法哈里森悬滴培养法”，将蛙胚原始脊髓节段，移到事先滴有从成体蛙淋将蛙胚原始脊髓节段，移到事先滴有从成体蛙淋将蛙胚原始脊髓节段，移到事先滴有从成体蛙淋将蛙胚原始脊髓节段，移到事先滴有从成体蛙淋巴囊吸取的新鲜淋巴的盖玻片上，淋巴很快凝固，巴囊吸取的新鲜淋巴的盖玻片上，淋巴很快凝固，巴囊吸取的新鲜淋巴的盖玻片上，淋巴很快凝固，巴囊吸取的新鲜淋巴的盖玻片上，淋巴很快凝固，使组织小块固定在一定的位置上然后将盖玻片使组织小块固定在一定的位置上然后将盖玻片使组织小块固定在一定的位置上然后将盖玻片使组织小块固定在一定的位置上然后将盖玻片倒置于一块中央凹陷的厚载玻片上，盖玻片的周倒置于一块中央凹陷的厚载玻片上，盖玻片的周倒置于一块中央凹陷的厚载玻片上，盖玻片的周倒置于一块中央凹陷的厚载玻片上，盖玻片的周缘用蜡封固蛙胚神经组织存活了数周，由此建缘用蜡封固蛙胚神经组织存活了数周，由此建缘用蜡封固蛙胚神经组织存活了数周，由此建缘用蜡封固。
蛙胚神经组织存活了数周，由此建立了体外培养组织和细胞的基本模式系统立了体外培养组织和细胞的基本模式系统立了体外培养组织和细胞的基本模式系统立了体外培养组织和细胞的基本模式系统19231923年，年，CarrelCarrel设计了设计了卡式瓶培卡式瓶培养法养法，扩大了组，扩大了组织的生存空间织的生存空间组织培养发展示意图组织培养发展示意图 美国学者美国学者美国学者美国学者Lewis WHLewis WHLewis WHLewis WH等人工合成培养基代替血浆和等人工合成培养基代替血浆和等人工合成培养基代替血浆和等人工合成培养基代替血浆和胚胎提取液等天然培养液的培养方法胚胎提取液等天然培养液的培养方法胚胎提取液等天然培养液的培养方法胚胎提取液等天然培养液的培养方法7年年年年Dulbecco Dulbecco Dulbecco Dulbecco 等采用等采用等采用等采用胰蛋白酶消化胰蛋白酶消化胰蛋白酶消化胰蛋白酶消化处理和应用处理和应用处理和应用处理和应用液体培养基的方法，获得了的单层细胞培养，单液体培养基的方法，获得了的单层细胞培养，单液体培养基的方法，获得了的单层细胞培养，单液体培养基的方法，获得了的单层细胞培养，单层培养成了组织培养普遍应用的技术。
促进了层培养成了组织培养普遍应用的技术促进了层培养成了组织培养普遍应用的技术促进了层培养成了组织培养普遍应用的技术促进了细细细细胞系胞系胞系胞系(cell line)(cell line)(cell line)(cell line)的建立的建立的建立的建立近年各种条件已商品化系列化，应用冷冻技术，近年各种条件已商品化系列化，应用冷冻技术，近年各种条件已商品化系列化，应用冷冻技术，近年各种条件已商品化系列化，应用冷冻技术，各国建立细胞库各国建立细胞库各国建立细胞库各国建立细胞库 我国组织培养的发展我国组织培养的发展20202020世纪世纪世纪世纪30303030年代传入我国年代传入我国年代传入我国年代传入我国20202020世纪世纪世纪世纪50505050年代起步年代起步年代起步年代起步20202020世纪世纪世纪世纪70707070年代，成为医学和生物学研究年代，成为医学和生物学研究年代，成为医学和生物学研究年代，成为医学和生物学研究中普遍应用的手段中普遍应用的手段中普遍应用的手段中普遍应用的手段细胞培养的优点细胞培养的优点 1 1、活细胞、活细胞：能能长时间长时间、直接观察直接观察、研究、研究活细胞活细胞的形态、结构、的形态、结构、生命活动生命活动。
2 2、可控制：、可控制：选择对象选择对象：均一性、重复性（类型、性质、阶段）：均一性、重复性（类型、性质、阶段）调节条件调节条件：各种LONG8官方入口因素（物理、化学、生物等因素）：各种因素（物理、化学、生物等因素）利用方法利用方法：研究技术、记录方法：研究技术、记录方法 3 3、应用广：、应用广：领域多领域多：医学研究、生物技。
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