确认空调、传递窗人员右手拿住培养瓶底部， 左手拧开瓶盖， 轻轻翻转培养瓶使上清液沿其顶面流
至废液缸。 辅助人员打开装生长液的瓶口， 并将其在火焰外焰旋转 1 LONG8股份有限公司圈后， 放置盐水瓶架上
待用。 操作人员将培养瓶盖拧松放置酒精灯附近， 将生长液用吸管吸取或直接倒入其中 （加
开启层流罩，观察其运行是否正常，用消毒剂将台面、墙面、地面、保护帘及层流
检查本次操作所用灭菌物品外包装是否严密，是否在效期内。检查本次操作所用溶液 /
试剂瓶内是否有异物，瓶表面是否有裂纹，瓶塞是LONG8股份有限公司否松动，溶液名称、批号、数量、有效期
细胞传代用液体： MEM液，新生牛血清、 3%谷氨酰胺溶液、庆大霉素、 %NaHCO3溶液、
向 MEM中依次加入新生牛血清、 3%谷氨酰胺溶液、 庆大霉素、 %NaHCO3。辅助人员盖紧瓶口，在瓶身用记号笔注明用量、日期等，混匀待用。
辅助人员将 PBS打开，用酒精灯将瓶口消毒后放到盐水瓶架上待用。 操作人员将培养瓶
打开，将上清液沿培养瓶上表面倒至废液桶。然后在酒精灯旁将 PBS倒入培养瓶，倒入量：
30ml/ T75 cm 2 瓶。（加量：～ ml/cm 2）盖上盖子， PBS交由辅助人员盖紧塞子，标记用量、
辅助人员将消化液瓶口打开， 将瓶口用火焰消毒后放到盐水瓶架上待用。 同时将培养瓶
盖子打开交由操作人员。 操作人员用吸管吸 3ml 细胞消化液到培养瓶底， （消化液加量： ~ ml /cm2）盖好瓶盖。辅助人员将消化液盖好，标记用量、日期。操作人员翻转培养瓶，使细胞
消化液铺满整个细胞面， 静置待细胞间质疏松后翻转培养瓶， 使消化液盐沿培养瓶上面倒入
废液缸中，盖紧瓶盖置℃恒温或室温继续作用 5～ 10 分钟。
注意事项：细胞培养瓶开盖后最好要 45倾斜，操作完成后马上盖好盖子。室温消化细胞时肉眼观察细胞面呈针眼状时应倒掉细胞消化液，避免细胞脱落。
辅助人员将生长液打开， 用火焰消毒后放到盐水瓶架上待用。 操作人员将消化好的培养瓶打开，用吸管吸 10ml 至 T75 cm2 瓶中，用吸管冲洗下细胞，吹打分散，制成均匀的细胞悬液。
操作人员将细胞悬液平均分种至 2 个 T175 cm 2 培养瓶中，，加生长液至 75ml。
辅助人员将细胞的批号、代次、传代比例、瓶编号、日期标记在 2 个 T175 cm2 细胞培